Elettroforesi: cos'è, a cosa serve e come si fa

Contenuto

• Cosa serve
• Come si fa
• Tipi di elettroforesi
• 1. Elettroforesi dell'emoglobina
• 2. Elettroforesi delle proteine

L'elettroforesi è una tecnica di laboratorio eseguita con l'obiettivo di separare le molecole in base alla loro dimensione e carica elettrica in modo da poter fare la diagnosi di malattie, verificare l'espressione delle proteine ​​o identificare i microrganismi.

L'elettroforesi è una procedura semplice ed economica, utilizzata nella routine di laboratorio e nei progetti di ricerca. A seconda dello scopo dell'elettroforesi, potrebbe essere necessario eseguire altri test ed esami per raggiungere una diagnosi, ad esempio.

Cosa serve

L'elettroforesi può essere eseguita per diversi scopi, sia nei progetti di ricerca che nella diagnosi, poiché è una tecnica semplice ed a basso costo.Pertanto, l'elettroforesi può essere eseguita per:

• Identificare virus, funghi, batteri e parassiti, con questa applicazione più comune nei progetti di ricerca;
• Test di paternità;
• Controlla l'espressione delle proteine;
• Identificare le mutazioni, essendo utili nella diagnosi di leucemia, per esempio;
• Analizzare i tipi di emoglobina circolante, utili nella diagnosi dell'anemia falciforme;
• Valuta la quantità di proteine ​​presenti nel sangue.

In base allo scopo dell'elettroforesi, potrebbe essere necessario eseguire altri test complementari per il medico per completare la diagnosi.

Come si fa

Per eseguire l'elettroforesi, è necessario il gel, che può essere poliacrilammide o agarosio a seconda dello scopo, tampone e vasca per elettroforesi, marker di peso molecolare e un colorante fluorescente, oltre a un'apparecchiatura di luce UV o LED, nota anche come transilluminatore.

Dopo aver preparato il gel, è necessario posizionare un oggetto specifico in modo che i pozzetti siano realizzati nel gel, comunemente chiamato pettine, e lasciare che il gel si solidifichi. Quando il gel è pronto, basta applicare le sostanze nei pozzetti. Per questo è necessario posizionare in uno dei pozzetti un marker di peso molecolare, un controllo positivo, che è la sostanza che si sa cos'è, un controllo negativo, che garantisce la validità della reazione, e dei campioni da analizzare. Tutti i campioni devono essere miscelati con un colorante fluorescente, in quanto in questo modo è possibile visualizzare le bande sul transilluminatore.

Il gel con i campioni deve essere posto nella vasca di elettroforesi, che contiene la specifica soluzione tampone, e quindi il dispositivo viene acceso in modo che ci sia corrente elettrica e, di conseguenza, differenza di potenziale, che è importante per le particelle di separazione in base alla loro carico e dimensioni. Il tempo di esecuzione elettroforetico varia in base all'obiettivo della procedura e può durare fino a 1 ora.

Dopo il tempo specificato, è possibile visualizzare il risultato della corsa elettroforetica attraverso il transilluminatore. Quando il gel viene posto sotto la luce UV o LED, è possibile visualizzare il pattern di banding: più grande è la molecola, minore è la sua migrazione, avvicinandosi al pozzo, mentre più leggera è la molecola, maggiore è il potenziale migratorio.

Affinché la reazione sia convalidata, le bande del controllo positivo devono essere visualizzate e nulla deve essere visualizzato nel controllo negativo, poiché altrimenti è un'indicazione che c'è stata contaminazione e l'intero processo deve essere ripetuto.

Tipi di elettroforesi

L'elettroforesi può essere eseguita per diversi scopi e, a seconda del suo scopo, possono essere utilizzati diversi tipi di gel, i più comuni sono poliacrilammide e agarosio.

L'elettroforesi per identificare i microrganismi è più comune da eseguire nei laboratori di ricerca, tuttavia, per scopi diagnostici, l'elettroforesi può essere utilizzata per identificare malattie ematologiche e malattie che evolvono con l'aumento della quantità di proteine, essendo i principali tipi di elettroforesi:

1. Elettroforesi dell'emoglobina

L'elettroforesi dell'emoglobina è una tecnica di laboratorio eseguita per identificare i diversi tipi di emoglobina circolanti nel sangue, consentendo di identificare la presenza di malattie legate alla sintesi dell'emoglobina. Il tipo di emoglobina viene identificato mediante elettroforesi ad un pH specifico, idealmente compreso tra 8,0 e 9,0, con un pattern di bande paragonabile al pattern normale, consentendo l'identificazione di emoglobine anomale.

A cosa serve: L'elettroforesi dell'emoglobina viene eseguita per indagare e diagnosticare malattie legate alla sintesi dell'emoglobina, come l'anemia falciforme e la malattia da emoglobina C, oltre ad essere utile nella differenziazione della talassemia. Impara a interpretare l'elettroforesi dell'emoglobina.

2. Elettroforesi delle proteine

L'elettroforesi delle proteine ​​è un esame richiesto dal medico per valutare la quantità di proteine ​​circolanti nel sangue e, quindi, per identificare le malattie. Questo esame viene eseguito da un campione di sangue, che viene centrifugato per ottenere il plasma, la parte di sangue costituita, tra le altre sostanze, da proteine.

Dopo l'elettroforesi si può visualizzare un pattern di bande e, successivamente, un grafico in cui è indicata la quantità di ciascuna frazione di proteine, fondamentale per la diagnosi.

A cosa serve: L'elettroforesi delle proteine ​​consente al medico di indagare sull'insorgenza di mieloma multiplo, disidratazione, cirrosi, infiammazione, malattie del fegato, pancreatite, lupus e ipertensione in base al pattern delle bande e al grafico presentato nel referto dell'esame.

Comprendi come viene fatto e come capire il risultato dell'elettroforesi delle proteine.